胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）是以健康母牛怀孕4至8个月龄的胎牛血液为原料，通过无菌采集、分离以及微孔过滤等多重工序制成。它在各类真核细胞的培养中被广泛应用，提供重要的营养成分及促进细胞生长的因子，如今已成为各大生物医学实验室的“常客”。为了最大限度地发挥胎牛血清的功效，并保障培养细胞的状态，以下是一些实用的小贴士，可帮助科研人员顺利进行细胞实验。让我们一起来看看吧！

一、如何正确解冻初次开封的胎牛血清？

胎牛血清通常储存于-20℃下，长期保存可选择-80℃。解冻时不建议将其直接置于室温（25-37℃），以避免产生絮状沉淀，从而影响血清质量。推荐的解冻方法是先将其从-20℃或-80℃转移至4℃，待完全变为液体后，再将其从4℃转移至室温。在解冻过程中，应当时常轻轻摇动，以帮助血清内成分与温度的均匀混合，减少沉淀的产生。解冻后，可将血清分装于无菌的15mL或50mL离心管中，根据使用频率选择存放在4℃的已解冻分装血清。请注意，解冻后的血清不应在37℃或室温下存放过久，以防重要的细胞生长因子失活，影响细胞状态。

二、血清的合适用量

原则上，添加的血清量不宜过多，通常推荐的浓度为5%、10%或20%。大多数细胞正常培养时使用10%的血清浓度，而某些细胞在原代提取时可使用20%的血清。具体适用于某种细胞的血清浓度应根据细胞特性和实验目的进行探索。

三、何时需要热灭活胎牛血清？

热灭活指的是将已解冻的血清在56℃下加热30分钟，此步骤可使补体失活，补体参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺释放、增强吞噬作用等。对于大多数常规细胞培养而言，热灭活并不是必要的步骤。经过热灭活的血清对细胞生长的影响较小，且高温可能会降低血清质量，反而导致细胞生长速率降低和沉淀物增多等不良影响。

四、更换血清的正确步骤

在培养细胞时，常会遇到需要更换血清的情况。如果直接将另一种血清替代旧血清，可能会导致细胞的增殖速度骤减甚至脱壁死亡。这通常是由于细胞适应了原有的培养环境，因此突然更换新的营养环境（即便是质量更好的血清）也可能导致不适应。更换血清时，建议遵循逐步更换的原则，以保证细胞能够顺利适应。开始使用新血清时，如需复苏细胞，建议使用原培养体系进行细胞复苏，待细胞状态恢复后再进行新的测试。测试时，请勿一次性将旧血清全部替换为新血清，而应采用比例梯度替换，例如首次更换比例为1:3，第二次为1:1，第三次为3:1，最后完全替换。对于对培养环境较敏感的细胞，应进一步优化替换比例。

五、血清解冻后出现的悬浮物及是否继续使用

若解冻后发现少量乳白色的絮状或点状物质，这通常是血清中的脂蛋白变性及纤维蛋白造成的。这些悬浮物不会影响血清本身的质量，可以通过400×g离心5分钟取上清进行使用。一般情况下，这些悬浮物不会对细胞产生太大影响。

六、使用前是否需过滤血清？

一般情况下，厂家提供的胎牛血清已为无菌状态，无需再次过滤。如发现血清中有悬浮物，可以将其与培养液一同过滤，切勿单独过滤血清。

七、观察到黑点是否为污染？

在细胞培养过程中，如果观察到黑点，首先应检查培养基是否混浊，以及黑点是否非规则游动。若细胞被污染，微生物将大量繁殖，培养基很快变黄、混浊。污染可包括细菌污染或支原体污染等。如果在显微镜下观察细胞，且生长状态良好，黑点的出现可能与以下几个因素有关：(1)细胞自然破碎后留下的残骸；(2)血清中杂蛋白的沉淀；(3)配制培养基时水质或容器不合格。对于这些黑点，可以应用离心或过滤方法去除；若是在原代细胞中出现，可能是原代组织中的杂质，通过多次传代可以消除。

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