### 培养条件

在进行细胞培养时，应遵循如下培养条件以确保细胞的健康生长：

• 气相：95%空气 + 5%二氧化碳
• 温度：37℃
• 培养基：MEM + 10% FBS + 1% P/S

对于贴壁细胞的传代，建议的传代比例为1:2。

### 传代方法

细胞的传代操作需要在细胞达到80%汇合度时进行。若未达到，需收集培养液并补充培养基至37℃，5% CO2的培养环境中进行培养。当细胞密度超过80%时，可以进行传代。

传代步骤如下：

1. 废弃上清液，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，随后在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞如有大部分脱落则立即停止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，吸取细胞悬液转移至离心管，进行1000rpm离心5分钟。
4. 去除上清，重悬于1-2ml完全培养基中，按1:2比例分瓶传代。

### 细胞冻存

在细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，可进行冻存步骤：

1. 废弃培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态，等待细胞变圆时加入完全培养基终止消化。
3. 将悬液转移至离心管，1000rpm离心5分钟后，加入无血清冻存液，混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存管放入-80℃冰箱保存，24小时后转入液氮罐中。

### 细胞复苏

细胞复苏时，从液氮中取出的冻存管应迅速放入37℃水浴中解冻，确保细胞快速复苏。

解冻后将细胞转移到含有完全培养基的离心管中，离心处理，再次重悬后接种至培养瓶中，保持于37℃，5% CO2的培养环境中继续培养。

### 注意事项

在运输过程中，细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如发现大量细胞脱离，可进行适当处理后再传代。遵循以上步骤，可以确保ag尊龙凯时品牌细胞产品在培养和传代过程中的高效性与稳定性。