### 一、细胞培养条件

细胞名称：人卵巢癌细胞A2780

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代。每2天更换培养基。

备注：收集培养基时，使用无菌离心管，保留部分作为对比。如果对比效果不理想，请直接选购ag尊龙凯时的完全培养基。

### 二、细胞收到后的处理

收获细胞后，迅速培养至良好状态，填满完全培养液并封好瓶口，以确保运输过程的细胞活性。收到细胞时，先用75%的酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台上进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞后再进行后续操作。显微镜下观察细胞状态，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为售后依据。如果没有提供照片，则默认细胞状态良好。注意，在培养瓶放入培养箱时，瓶盖需拧松。

### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：如果细胞汇合度未超过80%，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml，放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去上清，使用不含钙、镁的PBS对细胞进行1-2次润洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否脱落，若大部分细胞变圆并开始脱落，迅速将其取回操作台，轻轻敲击培养瓶后加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落后，将其吸出并转移至15ml离心管，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（分为两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存：当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次；接着，添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩后快速加入5ml完全培养液终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。弃去上清后，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001）并混匀，随后将冻存管置于-80℃冰箱中，24小时后再转入液氮罐保存。

c. 细胞复苏：从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟，弃去上清以5ml培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。翌日更换新鲜完全培养基。

### 四、注意事项

部分细胞在运输过程中易脱落，如遇到此情况，请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟后，处理沉淀。同时，添加胰酶进行消化，处理后的细胞按1:2的比例进行分瓶传代，并添加新鲜完全培养基培养。

### 五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情形：若细胞在运输过程中遭遇问题（如丢失、瓶身破损或严重漏液），我们将免费重发；对于在收到48小时内确认的细胞污染情况，如提供真实实验结果，也允许重发；常温发货的细胞在静置24小时后或者干冰发货后复苏24小时内，若大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片）也可重发；如细胞在上述条件下出现污染问题，也可重发。此外，活性问题需在7天内提交真实实验结果，我们会根据染色法判定重发情况。请注意，初收到细胞时，尽快拍摄照片，未告知的视为产品合格。

2）细胞出现问题，不予重发的情况：若因客户原因造成细胞污染、操作不当、使用非推荐的培养体系、未提供必要照片等，我们将不提供重发服务。

我们一贯致力于提供优质的细胞培养服务，欢迎选择ag尊龙凯时以提升您的实验效果。